Augu un patogēnu materiāli
Sorgo asociācijas kartēšanas populāciju, kas pazīstama kā sorgo konversijas populācija (SCP), nodrošināja Dr. Pats Brauns Ilinoisas Universitātē (tagad UC Davis).Tas ir aprakstīts iepriekš un ir dažādu līniju kolekcija, kas pārveidota par nejutīgumu pret fotoperiodu un mazāku augumu, lai veicinātu augu augšanu un attīstību ASV vidē.Šajā pētījumā tika izmantotas 510 līnijas no šīs populācijas, lai gan sliktas dīgtspējas un citu kvalitātes kontroles problēmu dēļ ne visas līnijas tika izmantotas visu trīs pazīmju analīzē.Galu galā hitīna reakcijas analīzei tika izmantoti dati no 345 līnijām, flg22 atbildes analīzei no 472 līnijām un TLS rezistences analīzei no 456 līnijām.B. cookeicelms LSLP18 tika iegūts no Dr. Burt Bluhm Arkanzasas Universitātē.
MAMP atbildes mērīšana
Šajā pētījumā tika izmantoti divi dažādi MAMP flg22 (genscript katalogs Nr. RP19986) un hitīns .Sorgo augi tika audzēti ieliktņos, kas tika novietoti uz plakaniem, kas piepildīti ar augsni (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) siltumnīcā.Augi tika laistīti dienu pirms paraugu ņemšanas, lai savākšanas dienā izvairītos no papildu lapu mitruma.
Līnijas tika randomizētas un loģistikas apsvērumu dēļ tika stādītas 60 līniju partijās.Katrā rindā tika iestādīti trīs “podi” ar divām sēklām katrā rindā.Nākamās partijas tika stādītas, tiklīdz iepriekšējā partija bija apstrādāta, līdz tika novērtēta visa populācija.Abiem MAMP tika veikti divi eksperimentālie braucieni ar genotipiem, kas tika atkārtoti nejaušināti katrā no diviem braucieniem.
ROS testi tika veikti, kā aprakstīts iepriekš.Īsumā katrai līnijai 3 dažādos podos tika iestādītas sešas sēklas.No iegūtajiem stādiem tika atlasīti trīs, pamatojoties uz viendabīgumu.Stādi, kas izskatījās neparasti vai bija ievērojami garāki vai īsāki par lielāko daļu, netika izmantoti.Trīs dažādu 15 dienas vecu sorgo augu 4. lapas platākajā daļā tika izgriezti četri lapu diski ar 3 mm diametru.Viens disks uz katru lapu no diviem augiem un divi diski no viena auga, otrais disks kļūst par ūdens kontroli (skatīt zemāk).Diski tika atsevišķi peldēti uz 50 µl H20 melnā 96 iedobju plāksnē, noslēgti ar alumīnija blīvējumu, lai izvairītos no gaismas iedarbības, un turēti istabas temperatūrā nakti.Nākamajā rītā tika pagatavots reakcijas šķīdums, izmantojot 2 mg/ml hemiluminiscences zondi L-012 (Wako, kataloga nr. 120-04891), 2 mg/ml mārrutku peroksidāzi (tips VI-A, Sigma-Aldrich, kataloga Nr. P6782) un 100 mg/ml hitīna vai 2 μM Flg22.Trīs no četrām iedobēm pievienoja 50 µl šī reakcijas šķīduma.Ceturtā iedobe bija izspēles kontrole, kurai tika pievienots reakcijas šķīdums, izņemot MAMP.Katrā plāksnē tika iekļautas arī četras tukšas iedobes, kurās bija tikai ūdens.
Pēc reakcijas šķīduma pievienošanas luminiscence tika mērīta, izmantojot SynergyTM 2 multi-detection mikroplašu lasītāju (BioTek) ik pēc 2 minūtēm 1 stundu.Plākšņu lasītājs veic luminiscences mērījumus ik pēc 2 minūtēm šīs 1 stundas laikā.Tika aprēķināta visu 31 rādījuma summa, lai iegūtu katras iedobes vērtību.Aprēķinātā MAMP reakcijas vērtība katram genotipam tika aprēķināta kā (trīs eksperimentālo iedobju vidējā luminiscences vērtība — imitācijas iedobes vērtība) mīnus vidējā tukšā iedobes vērtība.Tukšās iedobes vērtības pastāvīgi bija tuvu nullei.
Lapu diski noNicotiana benthamiana, katrā 96 iedobju plāksnē kvalitātes kontroles nolūkos kā kontroles tika iekļauta arī viena augsti reaģējoša sorgo līnija (SC0003) un viena zema reakcijas sorgo līnija (PI 6069).
B. cookeiinokulāta sagatavošana un inokulācija
B. cookeiinokulāts tika sagatavots, kā aprakstīts iepriekš.Īsumā, sorgo graudus iemērc ūdenī trīs dienas, noskaloja, ievietoja 1 l koniskajās kolbās un stundu autoklāvā 15 psi un 121 ° C temperatūrā.Pēc tam graudi tika inokulēti ar apmēram 5 ml macerēta micēlija no svaigas kultūrasB. cookeiLSLP18 izolē un atstāj uz 2 nedēļām istabas temperatūrā, kratot kolbas ik pēc 3 dienām.Pēc 2 nedēļām ar sēnīti inficētie sorgo graudi tika žāvēti gaisā un pēc tam uzglabāti 4 ° C temperatūrā līdz lauka inokulācijai.Tas pats inokulāts tika izmantots visā izmēģinājumā un katru gadu tika pagatavots svaigs.Inokulācijai 4–5 nedēļas veco sorgo augu virpulī ievietoja 6–10 invadētos graudus.Sporas, kas radušās no šīm sēnēm, izraisīja infekciju jaunos sorgo augos nedēļas laikā.
Sēklu sagatavošana
Pirms stādīšanas uz lauka sorgo sēklas tika apstrādātas ar fungicīdu, insekticīdu un aizsargvielu maisījumu, kas satur ~ 1% Spirato 480 FS fungicīdu, 4% Sebring 480 FS fungicīdu, 3% Sorpro 940 ES sēklu aizsarglīdzekli.Pēc tam sēklas 3 dienas žāvēja gaisā, kas nodrošināja plānu šī maisījuma pārklājumu ap sēklām.Aizsargviela ļāva izmantot herbicīdu Dual Magnum kā ārstēšanu pirms dīgšanas.
Mērķa lapu plankumainības izturības novērtējums
SCP tika stādīts Centrālajā kultūraugu pētniecības stacijā Kleitonā, NC 2017. gada 14.–15. jūnijā un 2018. gada 20. jūnijā randomizētā pilnā bloka dizainā ar divām eksperimentālām atkārtojumiem katrā gadījumā.Eksperimenti tika stādīti 1,8 m vienrindās ar 0,9 m rindas platumu, katrā lauciņā izmantojot 10 sēklas.Katra eksperimenta perifērijā tika iestādītas divas robežrindas, lai novērstu malu ietekmi.Eksperimenti tika inokulēti 2017. gada 20. jūlijā un 2018. gada 20. jūlijā, kad sorgo augi bija 3. augšanas stadijā. Vērtējumi tika ņemti no viena līdz deviņām skalām, kur augi, kuriem nebija slimības pazīmju, tika novērtēti kā deviņi un pilnībā. mirušie augi tika novērtēti kā viens.Divi novērtējumi tika veikti 2017. gadā un četri rādījumi 2018. gadā, sākot divas nedēļas pēc inokulācijas katru gadu.sAUDPC (standartizēts laukums zem slimības progresēšanas līknes) tika aprēķināts, kā aprakstīts iepriekš.
Publicēšanas laiks: 01.04.2021